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本试剂盒基于SABC-POD系统，适用一抗为兔IgG、标本为培养细胞或冰冻切片的免疫组化。

冰冻切片和培养细胞做免疫组化时，由于内源性抗体的抗原性完好保存，一般免疫组化试剂盒就会碰到严重的背景染色问题，尤其是丙酮固定的标本。本试剂盒所用的二抗是生物素标记的抗兔IgG，具有高度的特异性，不和兔以外任何抗体起反应，所以不会因二抗引起背景染色。此外，本试剂盒也能用于兔标本石蜡切片的免疫组化，背景染色优于普通试剂盒。

• 粘片剂APES(货号：ZN1946)或Poly-L-lysine(货号：ZN1945)。
  
• EDTA抗原修复液(10×)(货号：ZN1951)。
  
• 0.02M PBS（pH7.2～7.6），可选购PBS缓冲液粉剂(pH7.2～7.6)(货号：ZN2950)
  
• 0.01M枸橼酸盐缓冲液(货号：ZN1955)，配制方法：1000mL蒸馏水中加3g二水枸橼酸三钠，0.4g一水枸橼酸。
  
• DAB显色试剂盒(货号：ZN2968)。

• 石蜡片热修复染色步骤：
  
  • 石蜡切片，常规脱蜡至水。
    
  • 3% H2O2去离子水室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS(ZN2950)冲洗，5min×3次。
    
  • 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
    
  • 热修复抗原：将切片浸入到EDTA修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5～10min再修复1～2次，冷却。
    
  • 滴加5% BSA封闭液37℃孵育30min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素标记抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加SABC，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 显色：镜下控制反应时间。显色剂可选DAB (ZN2968)或AEC (ZN1963)。自来水充分冲洗。
    
  • 苏木素(ZN1971)复染，染色时间为0.5～2min。脱水，透明。
    
  • 选用中性树胶，水溶性封片剂(ZN2946)或其他适当的封片剂封片。B.石蜡片酶消化染色步骤：
    将A程序的第4步：滴加酶消化液室温5～10min。酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。蒸馏水洗2min×3次。
• 石蜡切片酶不消化/修复程序:
  对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第4步即可。
  
• 细胞片的染色步骤：
  
  • 爬片：圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1～2天，使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
    
  • 固定：4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 3% H2O2去离子水室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS(ZN2950)冲洗，5min×3次。
    
  • 打孔：0.25% Triton X-100处理细胞15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
    
  • 酶消化处理室温5～10min。酶消化可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 滴加5%BSA封闭液37℃孵育30min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素标记抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加SABC，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 显色：镜下控制反应时间。显色剂可选DAB (ZN2968)或AEC (ZN1963)。自来水充分冲洗。
    
  • 苏木素(ZN1971)复染，染色时间为0.5～2min。
    
  • 选用中性树胶，水溶性封片剂(ZN2946)或其他适当的封片剂封片。